Быстрый уреазный тест, также известный как CLO-тест (англ. Campylobacter-like organism test ) — это быстрый диагностический тест [en] для обнаружения бактерий Helicobacter pylori [1] . Основой теста является свойство Helicobacter pylori выделять фермент уреазу, которая катализирует процесс преобразования мочевины в аммиак и углекислый газ.
Содержание
Процесс [ править | править код ]
Тест выполняется в момент гастроскопии. Биопсия слизистой берётся из полости желудка, помещается в среду, содержащую мочевину и такой индикатор, как феноловый красный. Уреазы, преобразующие мочевину в аммиак, повышающий рН среды, и меняет цвет жёлтого образца (отрицательный) на красный (положительный). В результате реакции кислотно-щелочный баланс желудка (рН среды) сдвигается в щелочную сторону, что фиксируется с помощью индикатора. Полученный биоптат помещается в специальную ячейку с готовыми растворами. Быстрота изменения окраски индикатора с жёлтого на ярко-красный зависит от уреазной активности, которая, в свою очередь, зависит от количества бактерий. Основное назначение метода — первичная диагностика наличия Helicobacter pylori у пациентов. Чувствительность и специфичность данного метода составляет 90 %.
Преимущества [ править | править код ]
Метод позволяет получить заключение быстро — от нескольких минут до нескольких часов. Его использование не предполагает наличие специального лабораторного оборудования или подготовленных специалистов и выполняется непосредственно эндоскопистом. Дешев при массовом и индивидуальном применении. В настоящее время разработано большое количество промышленно изготовленных уреазных тестов.
Существует доказательства того, что H.pylori движется ближе к центру желудка у больных, находящихся на лечении с ингибиторами протонного насоса, и, таким образом, образцы данных пациентов должны получать из дна и тела желудка.
Недостатки [ править | править код ]
При малом количестве бактерий изменение окраски в уреазном тесте может произойти через несколько часов, а иногда возможен и ложноотрицательный результат. Кроме того, результат может быть положительным у лиц, желудок которых заселен H.heilmanii, имеющим близкое сродство с Helicobacter pylori. При появлении кокковых форм Helicobacter pylorii (например, после неудачно проведенной терапии), не проявляющих ферментативной уреазной активности, результат может быть ложноотрицательным.
Специфичность и чувствительность этого теста высоко по сравнению с гистопатологическим исследованием или мочевинным дыхательным тестом [en] . Тест часто делается в рамках диагностики у постели больного, чтобы снизить затраты времени и средств, необходимых для обнаружения хеликобактера при тестировании патологий.
Активное желудочно-кишечное кровотечение снижает точность теста [2] . .
Актуальность выбора идеального метода диагностики инфицирования Хеликобактер пилори до сих пор высокая. Нет на данный момент дешевого, высоко специфичного, доступного исследования. Наиболее соответствующим всем требованиям методом является определение уреазы. Важно знать, что такое уреазный тест и в чем его преимущество перед остальными методами исследования.
Биологическая основа методики
Хеликобактер пилори – это бактерия, которая имеет форму спирали и поражает слизистую желудка и двенадцатиперстной кишки. Персистенция микроорганизма приводит к развитию гастрита, гастродуоденита, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.
Попадая в полость желудка, бактерия проникает в слизистую оболочку. Там, закрепившись при помощи жгутиков, она начинает продуцировать фермент – уреазу. Вокруг колонии бактерий за счет фермента повышается рН, что приводит к активации компенсаторных механизмов продукции соляной кислоты клетками желудка. Также в повышенном количестве продуцируются гастрин и пепсин.
Помимо уреазы, Хеликобактер выделяет муциназу, липазу и протеазу – ферменты, которые расщепляют верхний защитный слой слизистой желудка. Вследствие этого соляная кислота, пепсин и гастрин попадают на незащищенные участки желудочного эпителия и начинают разъедать его. В месте воздействия появляются сначала воспаление, затем эрозия и в итоге – язва.
Сама бактерия не подвержена воздействию агрессивной желудочной среды, так как вырабатывает уреазу, которая метаболизирует мочевину с образованием аммиака. NH3 локально повышает рН до 6, что создает для Хеликобактер пилори благоприятные условия к жизнедеятельности.
Уреазный тест на хеликобактер пилори как раз основан на способности бактерии расщеплять мочевину.
Показания
Диагностическую процедуру рекомендуется пройти следующим категориям пациентов:
- с болями в эпигастрии натощак и сразу после еды;
- имеющих родственников, инфицированных хеликобактер пилори;
- получающих лечение от гастрита и дуоденита.
Виды тестов
Выделяют несколько видов диагностических методов для обнаружения хеликобактер по наличию фермента – уреазы:
- уреазный дыхательный тест (UBT и ХЕЛИК-тест);
- быстрый уреазный тест с биоптатом желудка.
Дыхательный тест на Хеликобактер пилори
Метод исследования относится к неинвазивным. Он представлен в нескольких вариациях.
В основе UBT лежит употребление внутрь мочевины, меченой изотопом 13 С. Уреаза бактерий разлагает мочевину с радионуклидом до аммиака и углекислого газа, который сохраняет меченый углерод 13 С. Далее углекислый газ всасывается в желудке, доставляется в легкие и покидает организм с выдыхаемым воздухом. Пациент выдыхает в специальный контейнер, который исследуется с помощью газового спектрометра или лазерного прибора.
В основе дыхательного ХЕЛИК-теста лежит измерение исходного уровня аммиака в выдыхаемом воздухе, за которым следует употребление карбамида (мочевины) внутрь и повторное исследование уровня аммиака.
Подготовка
Перед исследованием следует соблюдать рекомендации:
- методика проводится на голодный желудок, последний прием пищи не позднее 8 часов назад, последний прием жидкости за час до процедуры;
- за две недели до тестирования отменяется употребление антибиотиков, ингибиторов протонной помпы (Омепразол, Пантопрозол) и блокаторов Н2-гистаминовых рецепторов (Ранитидин);
- за двое суток запрещен прием препаратов висмута (Де-Нол), антацидов, обезболивающих;
- необходимо ограничить прием алкоголя за несколько суток;
- следует соблюдать диетические рекомендации: отказаться от бобовых, жевательной резинки за сутки перед тестом;
- в день проведения метода нельзя курить;
- утром следует тщательно почистить зубы и прополоскать рот.
Методика проведения
13 С-дыхательный тест проводится по следующей инструкции:
- пациент делает нефорсированный выдох в специальный мешок-контейнер, после чего его сразу герметично закрывают;
- далее, следует выпить раствор меченой мочевины;
- через 30 минут необходимо повторно сделать нефорсированный выдох в герметичный мешок.
Дыхательный ХЕЛИК-тест проводится с использованием индикаторной трубки или спектрометра с обработкой результатов на компьютере. В первом случае пациент дышит в индикаторную трубку, а во втором в специальный прибор.
Алгоритм выполнения исследования похож в обоих случаях:
- пациенту в рот помещается трубка, дышать нужно не в нее, а с приоткрытым ртом;
- следует тщательно следить, чтобы в трубку не попала слюна, лучше вытащить и проглотить ее вовремя;
- через шесть минуть трубка вытаскивается;
- пациенту предлагают выпить раствор карбамида (мочевины) 500 мг, растворенной в 20 мл воды;
- затем следует тщательно пополоскать ротовую полость;
- трубка повторно устанавливается в рот и в течение шести минут проводится повторное исследование.
Расшифровка показателей
Что это такое – положительный уреазный тест? Это когда уровень аммиака после употребления 500 мг мочевину возрастает более 4 мм, а прирост по сравнению с донагрузочным тестом составляет более 2 мм.
Преимущества
Плюсы данных исследований заключаются в следующем:
- высокая информативность и специфичность;
- неинвазивность, можно проводить пациентам, которым противопоказана гастроскопия;
- быстрое получение результата;
- можно использовать для оценки эффективности лечения;
- исследуется вся слизистая желудка, а не ее локальные области.
Недостатки
Минусы состоят в следующем:
- высокая стоимость оборудования;
- ложноположительные результаты при персистенции уреазопродуцирующих микробов во рту.
Быстрый уреазный тест
Во время гастроскопии эндоскопистом проводится биопсия слизистой желудка в области пилорического отдела и измененных участков. Для выявления в кусочке ткани желудка уреазы необходимо поместить материал в специальную среду, которая содержит мочевину и индикатор. При наличии хеликобактерного фермента мочевина расщепится на углекислый газ и ионы аммония. рН среды отклонится в щелочную сторону и индикатор отобразит это сменой цвета.
Подготовка
За две недели перед проведением диагностики следует отказаться от приема препаратов висмута (Де-Нол), ингибиторов протонной помпы (Омепразол, Пантопрозол, Омез, Квамател), антибиотиков.
Накануне исследования легких ужин за 8 часов до проведения гастроскопии. Воду не пить после полуночи.
Методика проведения
Быстрый уреазный тест или «CLO-тест», «Де-Нол-тест», «ХЕЛПИЛ-тест» проводится по следующему алгоритму:
- с помощью щипцов на конце эндоскопа проводится биопсия ткани – отщипывание кусочка с области дна и тела желудка;
- материал помещается в среду, содержащую мочевину и индикатор феноловый красный;
- положительный результат фиксируется в случае изменения цвета индикатора с желтого на ярко-красный.
Расшифровка показателей
Результат ставится на основании интенсивности окраски индикатора. Эндоскопист оценивает окраску плюсами.
+ — 1 степени уреазной активности, низкий уровень Хеликобактер, окраска появляется в течение суток.
++ — 2 степень уреазной активности, умеренный уровень заражения бактерией, индикатор приобретает красный цвет в течение двух часов.
+++ — 3 степень уреазной активности, значительный уровень инфицирования, ярко-красный цвет индикатора в течение часа от проведения исследования.
Что это такое – отрицательный уреазный тест? Это когда индикатор не меняет свою окраску в течение 24 часов с момента начала исследования.
Преимущества
Быстрый уреазный тест с биоптатом желудка имеет следующие преимущества:
- быстрое проведение диагностики – в среднем около 30 минут;
- невысокая стоимость;
- не требует специфического дорогостоящего оборудования.
Недостатки
У быстрого уреазного теста есть несколько существенных недостатков, которые не позволяют считать данный метод – «золотым стандартом»:
- при недостаточном обсеменении бактериями биоптата на изменение окраски индикатора может понадобиться около двух часов;
- проведение метода дает информацию о состоянии слизистой желудка только в одном месте;
- материал, полученный во время эндоскопии, не подлежит дальнейшему гистологическому исследованию, за счет этого нет возможности сопоставить результат уреазного теста с микроскопическими изменениями слизистой;
- высокий уровень ложноположительных результатов за счет персистенции грамотрицательной флоры в желудке, которая также может вырабатывать уреазу в небольших количествах;
- в случае наличия язвенного кровотечения в желудке метод неинформативен.
Наука не стоит на месте, каждый день изобретаются более совершенные методы диагностики. Идеального исследования с оптимальным соотношением цены и качества нет. Необходимо выбрать для себя удобный способ обследоваться. При этом необходимо опираться на мнение специалиста, так как данная статья не является руководством к действию.
На видео представлена информация по диагностике заболеваний желудка.
Диагностика Нelicobacter руlori очень важна, она достоверно устанавливает наличие или отсутствие бактерии в организме человека и позволяет определиться с тактикой лечения, если патоген был выявлен. Не менее важно уметь интерпретировать результаты проведённых обследований.
Расшифровка результата анализа на хеликобактер пилори
Расшифровка — это заключение, которое выдаёт врач после проведённого обследования, результат проводимых манипуляций.
Если доктор говорит о том, что анализы на хеликобактерную инфекцию отрицательные – это означает, что бактерии в организме не обнаружено. Пациент здоров. И наоборот, положительный результат свидетельствует об инфицированности.
Каждый метод исследования имеет свои специфические нормы и пределы, по которым производится оценка наличия патогенного микроорганизма или его отсутствия, некоторые анализы позволяют выявить степень заражённости и стадию активности жизнедеятельности бактерии.
Как разобраться во врачебных заключениях проведённого обследования? Расшифруем результаты каждого метода диагностики Н.руlori.
Норма анализа на хеликобактер пилори
В организме как взрослых, так и детей данной бактерии быть не должно. Поэтому нормой для любого анализа на этот микроб будет отрицательный результат:
- Отсутствие самой бактерии при проведении исследования мазков слизистой желудка под микроскопом. Глаз врача диагноста под многократным увеличением не выявляет S-образных микробов cо жгутиками на конце тела.
- Не будет окрашивания в малиновый цвет индикатора в тест-системе при проведении уреазного теста. После того, как биоптат слизистой поместят в среду экспресс-набора, ничего не произойдёт: цвет индикатора останется первоначальным (светло-желтым или другим, который заявлен производителем). Это норма. При отсутствии бактерии некому разлагать мочевину, превращая её в аммиак и углекислый газ. Не происходит защелачивание среды, к которой чувствителен индикатор.
- Менее 1% меченого изотопа 13С в выдыхаемом воздухе фиксируется при дыхательном тесте. Это означает, что ферменты хеликобактера не работают и не расщепляют мочевину, выпитую для исследования. А если ферменты не обнаружены, можно сделать вывод об отсутствии и самого микроорганизма.
- Нет роста колоний на питательных средах при проведении бактериологического метода. Важным составляющим успеха данного анализа является соблюдение всех режимов выращивания микроба: кислорода в среде должно быть не более 5%, используется специальный кровяной субстрат, поддерживается оптимальная температура. Если на протяжении пяти дней на среде не появились мелкие круглые бактериальные колонии, можно сделать вывод, что микроба в исследуемом биоптате не было.
- Отсутствие антител к патогену при проведении иммуноферментного анализа крови или низкий их титр 1:5 и менее. Если титр повышенный – хеликобактер в желудке присутствует. Антитела или иммуноглобулины (IgG, IgM, IgA) — это специфические белки иммунной системы, вырабатываемые с целью защиты от микроба и повышения сопротивляемости организма.
Если анализ на хеликобактер пилори положительный — что это значит
Положительный результат анализа означает наличие инфекции в организме. Исключение составляет положительный результат на титр антител, который может возникать при проведении ИФА крови сразу после эрадикации бактерии.
Даже если лечение от хеликобактер пройдено успешно, и бактерии больше нет в желудке, некоторое время антитела или иммуноглобулины к ней сохраняются и могут давать ложноположительный результат.
Поэтому не рекомендуется сдавать кровь на диагностику сразу после эрадикации, лучше сделать это спустя месяц. При успешном лечении все анализы будут показывать хеликобактер-негативный результат.
Во всех других случаях, положительный анализ означает присутствие микроба в желудке: бессимптомное носительство или болезнь.
Расшифровка цитологического исследования на хеликобактер
Исследование бактерии под микроскопом из мазков желудочной слизистой называется цитологическим. Для визуализации микроба мазки окрашивают специальным красителем, а затем рассматривают их под увеличением.
Если доктор наблюдает в мазках всю бактерию целиком ,он дает заключение о положительном результате анализа. Пациент заражён.
Далее он оценивает степень заражённости:
- + если видит до 20 микробов в поле зрения
- ++ до 50 микроорганизмов
- +++ более 50 бактерий в мазке
Если врач в цитологическом заключении сделал отметку в один плюс — это означает хеликобактер-слабоположительный результат: бактерия есть, но обсеменённость слизистой желудка не значительная. Три плюса свидетельствуют о значительной активности бактерий, их очень много и процесс воспаления выражен.
Расшифровка уреазного теста
Результаты экспресс-теста на фермент бактерии уреазу тоже основан на количественном принципе. Врач дает положительную оценку при изменении индикаторной окраски, скорость и степень её проявления выражает плюсами: от одного (+) до трёх (+++).
Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты анализа в норме. Когда уреазы, выделяемой Н.руlori много, она очень быстро расщепляет мочевину и образует аммиак, который защелачивает среду экспресс-панели.
На изменение среды активно реагирует индикатор и становится малиновым. Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты анализа в норме.
Чем больше в заключении уреазного теста плюсов, тем выше инфицированность:
Если окрашивание в малиновый цвет наблюдается в течение нескольких минут часа – врач сделает отметку в три плюса (+++). Это означает значительную инфицированность микробом.
Если при проведении уреазного теста, окрашивание в малиновый тест индикаторной полоски происходит в течении 2 часов – это означает, что заражение человека данным патогеном умеренное (два плюса)
Изменение цвета индикатора до 24 часов оценивается в один плюс (+), что свидетельствует о незначительном содержании бактерий в слизистом биоптате и расценивается как слабоположительный результат.
Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты в норме.
АТ к Helicobacter pylori — что это
Антитела или иммуноглобулины – это специфические соединения белковой природы, циркулирующие в крови человека. Они вырабатываются иммунной системой в ответ на проникновение инфекции в организм.
АТ вырабатываются не только в отношении конкретного патогена, но и ко многим другим агентам вирусной и бактериальной природы.
Повышение количества антител – их титра свидетельствует о развивающемся инфекционном процессе. Иммуноглобулины могут также сохраняться какое-то время и после уничтожения бактерии.
Выделяют несколько классов антител:
Helicobacter pylori IgG — количественная расшифровка анализа
Антитела к хеликобактер пилори (anti Helicobacter pylori в англоязычной литературе), относящиеся к классу иммуноглобулинов G появляются в крови не сразу после инфицирования микробом, а спустя 3-4 недели.
Выявляются антитела иммуноферментным анализом при взятии венозной крови. В норме IgG отсутствуют, либо их титр не превышает 1:5. Если этих белковых фракций нет, можно сказать, что инфекция не присутствует в организме.
Высокие титры и большое количество IgG может свидетельствовать о следующих состояниях:
- Наличие бактерии в желудке
- Состояние после проведения лечения
Даже после полного исчезновения патогена из организма после проведенной терапии, иммуноглобулины долгое время могут циркулировать в крови. Рекомендуется повторный ИФА-анализ с определением АТ проводить спустя месяц после окончания лечения.
Отрицательный тест может давать ложноположительные результаты: титр антител повышается с небольшим опозданием около месяца от момента заражения.
Человек может инфицироваться данным патогеном, но при проведении ИФА титр будет низкий – это может означать, что заражение произошло недавно, сроком до 3 недель.
IgG к хеликобактер пилори — какая норма
Нормы и титры IgG, их количественная характеристика зависит от методик определения и реактивов конкретной лаборатории. Нормой является отсутствие IgG при исследовании крови методом иммуноферментного анализа, либо его титр 1:5 и ниже.
Не стоит ориентироваться в постановке диагноза «хеликобактериоз» лишь на высокие титры антител. Они могут циркулировать в крови некоторое время после излечения, а также «запаздывать» в сроках появления при инвазии патогеном.
Метод ИФА и определение титра антител служит скорее вспомогательным методом, дополняющим более точные: цитологический, анализ кала ПЦР-методом, уреазный тест.
Хеликобактер пилори титр 1:20 – что это значит
Титр к иммуноглобулинам класса G 1:20 указывает на положительный результат анализа – инфекция в организме есть. Это достаточно высокий показатель. Считается, что цифры от 1:20 и выше указывают на существенную активность воспалительного процесса, который требует лечения.
Можно считать титры 1:40 – сильноположительными, свидетельствующими об интенсивной деятельности хеликобактера, а титр 1:10 –слабоположительным.
Уменьшение титра после лечения – хороший прогностический показатель эрадикационной терапии.
Helicobacter pylori IgM и IgA — что это
Иммуноглобулины класса М – это белковые фракции, которые раньше всех реагируют на заражение бактерией, и появляются в крови раньше других.
Положительный анализ на IgM возникает, когда титры данной фракции антител нарастают. Это происходит при инфицировании. IgA в крови обнаруживается, если хеликобактерный процесс достаточно активен и слизистая желудочная оболочка крайне воспалена.
В норме в здоровом организме иммуноглобулины данных классов либо отсутствуют, либо содержаться в несущественных количествах, которые не имеют диагностической значимости.