Цитология.su
Цитология - наука о клетке
Главная Цитология История Клетка Микроскопия Учёные Задачи цитологии Медицина Обратная связь Карта сайта
Приготовление, фиксация мазков, жидкостная цитология, окрашивание мазков
05 Апреля 2014
1

ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ. Материал необходимо распределить по мазку тонким слоем, важно, чтобы весь он оказался на стекле.

ФИКСАЦИЯ МАЗКОВ. Если мазки предполагается окрашивать по методу Папаниколау, их необходимо зафиксировать влажными, сразу после получения (влажная фиксации). Фиксацию проводят специальными аэрозолями или фиксатором в капельной форме (фиксатор наносят на влажную поверхность мазка) (рис. 9). Можно зафиксирован» мазки, поместив их после получения в кювету с 96% этиловым спиртом на 10-20 минут. Затем мазки высушивают на воздухе. Если мазки предполагается окрасить методом Романовского (модификации Лейшмана, Май-Грюнвальд-Гимзы, Паппенгейма и др.), их после получения высушивают на воздухе (сухая фиксация).

Если предполагается окрашивание гематоксилин-эозином, можно использовать как сухую, так и влажную фиксацию мазков.

ЖИДКОСТНАЯ ЦИТОЛОГИЯ. Б настоящее время все большее распространение получает так называемая жидкостная цитология. Материал берется в специальный стабилизирующий раствор (рис. 8, б), после чего его центрифугируют на цитоцентрифуге типа центрифуги Cyiospin (т. н. cytospin-препараты). Весь полученный материал оказывается на мазках и удается получить однослойные препараты хорошего качества. Можно сначала сделать мазки стандартным способом, а остающийся на щетке (шпателе) материал поместить в стабилизирующий раствор и обработать описанным выше методом. Очень важным преимуществом cytospin-препаратов является то, что их можно с успехом использовать для проведения молекулярно-биологических исследований. Б частности, выраженное уплощение клеток значительно улучшает качество образцов для выполнения иммуноцитохимических реакций и гибридизации in situ (см. Приложение).

ОКРАШИВАНИЕ МАЗКОВ. Каждый из перечисленных выше методов окрашивания имеет свои преимущества и недостатки. Метод окрашивания по Папаниколау является наилучшим для гинекологических мазков, так как этот метод позволяет оценить степень созревания цитоплазмы (от сине-зеленого цвета в незрелых клетках до розового в клетках со зрелой цитоплазмой и оранжевого в клетках с ороговением); благодаря влажной фиксации хорошо сохраняются ядра, клеточная мембрана и структура хроматина.

Преимуществом методов окрашивания по Романовскому является четкое прокрашивание ядер, вследствие чего хорошо просматривается структура хроматина, бактериальная флора.

Преимуществом гематоксилин-эозиновых красителей является выраженное окрашивание ядер с атипией, в связи с чем этот метод хорошо использовать для исследования мазков при скрининге.

Рис. 9. Получение материала из шейки матки и приготовление мазков: а - с помощью шпателя (1, 4), щетки (2, 5), фиксация мазков; б - с помощью щетки типа Cervex-Brush

 

    


1
Россия 2015