Получение и обработка материала для цитологического исследования

Для диагностического заключения по цито­логическим препаратам важно получение полно­ценного материала. Он должен быть взят не из ок­ружающих тканей, а из очага поражения. Трудности могут отмечаться при выраженном фиброзе или наличии кистозно измененных участков, в таких случаях нужно пытаться получить материал из разных участков опухоли, из стенок кисты; при некротических изменениях — стараться брать материал из периферии опухоли.

Материалом для цитологической диагностики может быть:

• пунктат молочной железы;

• отпечатки с биоптата;

• соскоб с ткани молочной железы (или опухоли), удаленной во время операции;

• выделения из соска (метод практически неэффективен для диагностики злокачественных новообразований молочной железы, за исключением внутрипротокового рака);

• материал, полученный с эрозивных поверхностей.

Пункционный материал

При проведении диагностической пункции необходимо соблюдать ряд правил:

Игла и шприц для пункции должны быть абсолютно сухими.

Не следует проводить анестезию пунктируемого образования в связи с тем, что сама пункция обычно не более болезненна, чем прокол иглой для анестезии, кроме того, применение новокаина может вызвать изменение клеточных элементов.

Мандреном, как правило, не пользуются, так как иглы, применяемые для диагностических пункций, имеют очень маленький диаметр и косой срез; игла легко продвигается через ткани, расположенные над пораженным участком (кожу, подкожную клетчатку, мышцы), расслаивая их, поэтому закупорка иглы происходит очень редко. — Нельзя пунктировать опухоль при подозре­нии на меланому.

Пункцию выполняют с соблюдением правил асептики и антисептики.

Техника выполнения пункции

Пункцию проводит лечащий врач или врач клинической лабораторной диагностики в про­цедурном кабинете, иногда — в больничной палате (в зависимости от тяжести состояния больного). Если требуется контроль за положением иглы (опухоль небольших размеров, образование с кальцинатами и проч.), пункция выполняется под рентгенологическим контролем или под контролем ультразвукового исследования, компьютерной томографии и других методов в соответствующем кабинете.

Перед проведением пункции участок поражения тщательно пальпируют, определяют его подвижностъ, связь с окружающими тканями и воз­можность оптимальной фиксации. Опухоль фик­сируют пальцами левой руки (если пунктирующий врач — правша).

Опухоль при пальпации кажется расположен­ной более поверхностно, чем на самом деле, по­этому угол направления иглы при аспирацион-ной пункции не должен быть перпендикулярен к ребрам. Это особенно важно соблюдать при ма­ленькой молочной железе, в которой опухоль может находиться близко к грудной стенке, и игла может попасть в ребро. Если игла попадет в ребро, в мазках можно обнаружить элементы кост-но-мозгового кроветворения (мегакариоциты, бластные клетки, миелоциты, эритробласты и проч.).

Пункцию производят тонкой иглой (наружный диаметр 0,6-0,7 мм), которая присоединяется к шприцу 10-20 мл. Иглу без шприца (или с присоединенным шприцем с опущенным поршнем) вводят через кожу в исследуемое образование под небольшим углом к грудной стенке. По достижении очага поражения осторожно паль­пируют ткань вокруг введенной иглы, определяя правильность прокола; при небольшом подкожном узле можно несколько наклонить иглу, при этом опухоль на игле сместится, что ощущается пальцами и подтверждает правильное ее положение. Не рекомендуется производить вращательные движения иглой, так как это наносит лишнюю травму, не приводя к получению более полноценного материала. После этого присоединяют шприц с опущенным поршнем (если он не был присоединен сразу) и делают два-три резких насасывающих движения, снимая шприц с иглы после каждого подъема поршня. По окончании взятия шприц необходимо снять, иглу извлекать без шприца, что позволяет сохранить материал; для цитологического исследования обычно достаточно материала, попавшего в просвет иглы.

Содержимое иглы выдувается на предметное стекло (или в контейнер со специальным консер­вирующим раствором для жидкостной цитологии) при помощи шприца, который наполняется воздухом и вновь соединяется с иглой. Материал распределяется по стеклу краем шлифованного стекла или ребром иглы (см. раздел «Приготов­ление препаратов»).

Если при проколе опухоли появляется жид­кость, то под иглу подставляют пробирку и со­бирают жидкость. Если она не стекает, можно ис­пользовать шприц, осторожно оттягивая поршень и набирая жидкость в шприц, после чего шприц снимают и его содержимое сливают в пробирку. После удаления всей жидкости и помещения ее в пробирку (с добавлением нескольких кристаллов цитрата натрия) обязательно следует тщательно пальпировать участок, из которого была удалена жидкость, для исключения остаточных масс, которые могли быть скрыты кистозным содержимым. Необходимо дополнительно пунк­тировать стенку кисты и приготовить мазки из этого материала.

Если при пункции получена жидкость, вся она должна быть доставлена в лабораторию.

Биопсийный материал

Цитологические препараты можно делать из материала, полученного при биопсии (столбика ткани):

— отпечатки выполняются путем аккуратного перемещения биоптата иглой по стеклу; при этом нужно стараться не травмировать био-псированный кусочек.

Операционный материал

— Разрез уплотнения, опухоли или лимфати­ческого узла необходимо проводить сухим скальпелем, чтобы избежать разрушения кле­ток водой.

— Операционный материал получают, прикла­дывая стекло к разрезу удаленной опухоли или другого участка поражения.

— Если консистенция ткани плотная, что не по­зволяет сделать отпечатки, производят соскоб с поверхности свежего разреза опухоли (путем легкого соскабливания скальпелем или краем предметного стекла с последующим приготовлением препарата).

Отделяемое из молочной железы

Для приготовления препарата. капля отделя­емого из молочной железы наносится на стекло и готовится мазок.

Если отделяемого немного, для получения мазков необходимо сцеживающими движени­ями, надавливая большим и указательным пальцами в области околососковой зоны, получить капли выделений из соска. Мазки-отпечатки с эрозированных поверхностей

К месту поражения прикладывается предметное стекло, на котором остается некоторое коли­чество клеточных элементов и отделяемого.

Материал можно брать также с помощью ватного тампона и наносить на предметное стекло в виде отпечатков.

Маркировка, доставка, обработка материала

Цитологический материал доставляют в ла­бораторию в ближайшие сроки после его полу­чения. Особенно это относится к содержимому кист и любому кровянистому материалу.

Для доставки необходимо иметь специальные контейнеры для предметных стекол, пробирки. Не допускается контакт нативного материала, в том числе подсушенного предметного стекла, с бланком-направлением.

Полученный материал доставляют в лабораторию с бланком-направлением, в котором дол- жны быть представлены паспортные данные обследуемой пациентки, диагноз, проведенное лечение, точно должна быть указана локализация участка, откуда был взят материал, и способ его получения.

Лаборант, который принимает материал, должен проверить маркировку препаратов, пробирок и т. д., оформление направления, отметить характер и количество биоматериала, число присланных мазков.

Приготовление препаратов

Правила приготовления препаратов едины вне зависимости от того, делается мазок специалистом, получившим материал, или готовится в лаборатории.

Стекла для препаратов нужно использовать новые, стандартного размера, чистые, обезжиренные и сухие.

Хороший мазок должен быть максимально тонким (максимально приближающимся к однослойному), равномерной толщины (не волнообразным) на всем протяжении. Материал распределяется по стеклу краем шлифованного стекла или ребром иглы.

Мазок должен начинаться на 1 см от узкого края предметного стекла и заканчиваться примерно в 1,5 см от другого края; мазок не должен дос- тигать широкого края стекла, между мазком и широким краем предметного стекла должно ос­таваться расстояние не менее 0,3 см.

Жидкости, полученные при пункции, тут же центрифугируют, сливают верхний слой центри-фугата, а из осадка делают мазки с помощью специального шлифованного стекла или пластинки (методика приготовления препаратов аналогична мазкам крови). При этом получаются тонкие препараты со щеточкой по краю для цитологического исследования.

Жидкостная цитология

— Лучшим способом обработки материала для цитологического исследования является жид­костная цитология. Препараты, приготовленные на цитоцентрифуге, однослойные, материал распределен равномерно на определенной поверхности.

Препараты удобно просматривать, так как материал распределен равномерно.

При необходимости проведения иммуноци-тохимических исследований экономятся дорогостоящие реактивы, результаты удобно интерпретировать.

Фиксация и окрашивание препаратов

Мазки можно окрашивать любым из краси­телей, используемых в цитологической диагнос­тике, однако наилучшие результаты получаются при использовании различных модификаций ме­тода Романовского (по Паппенгейму, Лейшману и др.). После приготовления мазков предвари­тельной их фиксации не требуется, они высуши­ваются на воздухе.

Окрашивания мазков по методу Паппенгейма

1. Высушить мазок на воздухе.

2. Опустить в фиксатор-краситель Мая-Грюн-вальда на 3 минуты.

3. Промыть водопроводной водой.

4. Стряхнуть избыток воды.

5. Докрашивание азур-эозином: 2 части 0,1% раствора азура, 1 часть 0,1% раствора водно-растворимого эозина и 3 части дистиллиро­ванной воды Ph 6,8-7,2, окрашивание 20 минут. Смесь красителей готовят перед работой (ex tempore). Мазки окрашиваются от 20 до 30 минут. (Время необходимо устанавливать опытным путем в зависимости от свойств кра­сителей, температуры воздуха, характера ма­териала и других факторов.)

6. Промыть водопроводной водой.

7. Высушить на воздухе.

Методика окрашивания по Лейшману

1. Высушить мазок на воздухе.

2. Опустить в фиксатор-краситель Лейшмана на 3 минуты.

3. Промыть водопроводной водой.

4. Стряхнуть избыток воды.

5. Опустить в краску (или залить краской) 40 мл 0,1% красителя азур II, 30 мл 0,1% воднора-створимого эозина, 70 мл дистиллированной воды. Смесь красителей готовят перед рабо­той (ex tempore). Мазки окрашиваются от 20 до 40 минут.